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发布时间:2020-08-17 09:01:04
PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,四区域分别为:1.***配制区2.样品处理区3.核酸扩增区4.产物分析区如使用全自动分析仪,区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能:完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。
PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流***形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
1、***贮存和准备区 该实验区主要进行的操作为贮存***的制备、***的分装和主反应混合液的制备。***和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。***原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存***。 对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
3、扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自***贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在***轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染***性,第二次加样必须在本区内进行。 本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
4、扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。本区是***主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
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文章来源:www.hnlab.net
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